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25羥基維生素D生物活性原料的開發

* 來源: * 作者: admin1 * 發表時間: 2017-03-29 16:30:08 * 瀏覽: 3111


項目背景

維生素D是脂溶性類固醇類衍生物,主要包括VD2(麥角鈣化醇)及VD3(膽鈣化醇)。在肝臟中,維生素D被羥基化為25羥基維生素D,多與維生素D結合蛋白(VDBP)結合,進入循環系統;25羥基維生素D是維生素D在血液中主要運輸形式,濃度高且穩定,半衰期長,其濃度被認為是評價維生素D水平的最佳指標[1]。

 

據估計,全世界大約有30%-50%的兒童和成年人的血清25羥基維生素D缺乏,在妊娠婦女中尤為明顯[2,3]。

原料難點

25羥基維生素D作為一個臨床有廣泛需求的項目,我們在發光、免疫熒光等平臺原料的研發過程中,遇到很多的困難,主要集中在以下方面:

l  小分子抗體的開發;

l  25(OH)D特異性抗體的開發;

l  兼容25(OH)D2、25(OH)D3、3-epi-25(OH)D3抗體的開發;

l  25(OH)D2、25(OH)D3等特異性抗體的篩選;

l  抗體原料要有足夠的定量范圍,覆蓋臨床上“不足”與“過量”;

經過長期的研發工作,同仁心的研發團隊目前已成功開發了兩組配對,基本上解決了上述各問題。

 

同仁心25羥基維生素D原料概況

在化學發光、酶聯免疫、熒光紙條等免疫平臺,我們均推薦采用”競爭法”檢測本項目,根據具體檢測目標不同,我們推薦的原料組合如下:

檢測目標

貨號

克隆號

類別

亞型

推薦使用

25(OH)D

(含D2&D3

GD11

BSA-25VD

抗原

IgG1

包被

GD21

1C7

抗體

——

標記

25(OH)D   3

(只檢測D3

GD12

BSA-25VD3

抗原

IgG1

包被

GD22

17E11

抗體

——

標記

組合1:抗體1C7可以同時識別25(OH)D2及25(OH)D3,配套抗原BSA-25(OH)D同時偶聯了25(OH)D2及25(OH)D3,該組合模式可以用于檢測樣本中的總25(OH)D;

組合2:抗體17E11能特異性識別25(OH)D3,不存在和25(OH)D2的交叉反應性,配套抗原BSA-25(OH)D3僅偶聯25(OH)D3,該組合可以用于特異性檢測樣本中的25(OH)D3。



同仁心25羥基維生素D原料性能

?  VD2&VD3特異性競爭結果

數據可見,1C7對VD2和VD3都有明顯的競爭效果;17E11僅對VD3有競爭效果。

?  靈敏度及檢測范圍

 



兩種組合模式,原料都可以實現3-300ng/ml范圍內的準確定量。(Roche試劑定量范圍:3-70ng/ml; Abbott試劑定量范圍:8-160ng/ml)

 

      ?  交叉反應性

注:Roche/Abbott為試劑說明書數據

 

?  對照原料的比較

科研人員選取了市場上部分主要的VD抗體,連同同仁心的抗體,進行了初步的性能評價:

在標記濃度相同的情況下,對抗體進行梯度稀釋,已考察抗體的活性:

 

 

可見,同仁心的抗體活性要明顯高于對照抗體。

此外,在競爭效果相近的情況下,比較了各組抗體的使用量:

 

 

數據可見,競爭效果相當的情況下,同仁心抗體使用濃度更低。


應用中的主要注意事項

1.     體系中鹽濃度建議≤50mm;

2.     體系中避免使用小牛、羊血清等動物來源,組分不明物質,避免外源25OHVD或動物其他蛋白干擾評價結果。




參考文獻               

[1] Holick MF Chen TC. Am J Clin Nutr 87(suppl),1080S – 1086S, 2008.

[2] Tao M, J Maternal Fetal Neonatal Med., 2012 Mar;25(3):237-9

[3] 《中國人群維生素D營養狀況》,吳光馳,中國婦幼衛生雜志,2010,1(1):51-54

[4] 《維生素D與成年人骨骼健康應用指南(2014年標準版)》,中國老年學學會骨質疏松委員會維生素D學科組專家委員會:中國骨質疏松雜志,2014

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